其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細介紹。MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型;有高壓滅菌型的,也有過濾除菌型的;還有含非必需氨基酸的類型。是基本、適用范圍廣的細胞培養(yǎng)基。DMEM細胞培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)。IMDM細胞培養(yǎng)基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎(chǔ)上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等??捎糜陔s交瘤細胞培養(yǎng),以及無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設(shè)計,含有BSS、21種氨基酸、維生素等,適于多種正常細胞和腫瘤細胞的培養(yǎng),也用做懸浮細胞培養(yǎng)。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素。Fischer’s培養(yǎng)基含有多類細胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無機鹽等多種成分。云南RPMI-1640細胞培養(yǎng)基批發(fā)
生物藥物生產(chǎn)過程中,DMEM 培養(yǎng)基扮演著關(guān)鍵角色。在單克隆抗體生產(chǎn)環(huán)節(jié),科研人員利用 DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)雜交瘤細胞,使其大量增殖并分泌高純度的單克隆抗體。在疫苗生產(chǎn)方面,DMEM 培養(yǎng)基用于培養(yǎng)病毒抗原,如流感疫苗生產(chǎn)中,通過在 DMEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)流感病毒,獲取足夠的病毒抗原,進而制備出安全有效的流感疫苗。此外,一些重組蛋白藥物的生產(chǎn)也依賴 DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞,這些細胞在培養(yǎng)基提供的營養(yǎng)環(huán)境下,高效表達出具有***價值的重組蛋白,為患者帶來希望。天津醫(yī)療細胞培養(yǎng)基源頭直供針對細胞培養(yǎng)應用,我們提供多種組分的MCDB改良培養(yǎng)基。
1640是培養(yǎng)基代號。RPMI-1640是改進型的McCoy‘s5A培養(yǎng)基,使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng),與大多數(shù)哺乳動物細胞培養(yǎng)基不同的是其典型的PH8的配方。RPMI-1640培養(yǎng)基常初是為淋巴細胞培養(yǎng)專門設(shè)計的,現(xiàn)在已廣泛應用于各種正常細胞和ai細胞的培養(yǎng),包括HeLa細胞、Jurkat細胞、MCF-7細胞、PC12細胞、PBMC細胞、星形膠質(zhì)細胞和ai細胞,是使用常為廣的培養(yǎng)基之一。
針對廣的細胞培養(yǎng)應用,我們提供多種組分的RPMI1640改良培養(yǎng)基。
RPMI-1640細胞培養(yǎng)基L-谷氨酰胺(Glutamine)是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素,但其在溶液中不穩(wěn)定,會自發(fā)降解,不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基,可以根據(jù)研究需要任意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量,在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長。
含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成(采用平衡鹽溶液溶解)與合成培養(yǎng)基(如MEM細胞培養(yǎng)基)以1:1的比例混合使用。目前用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。此外,血清含一些對細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。目前,血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用,使用濃度一般為5~20%,常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份復雜,批間差異大及存在病毒等外源污染風險,對下游生物制品的分離純化和安全性都存在較大的影響,在生物制藥行業(yè)的使用也越來越少。因此,基于對血漿成份的分析,合成細胞培養(yǎng)基應運而生。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計、配制的培養(yǎng)基。開發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(minimalessentialmedium,MEM)。Fischer’s培養(yǎng)基主要用于造血細胞的培養(yǎng),如淋巴母細胞和淋巴細胞的培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)基的種類很多,按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基(目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基),按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需由實驗者自己配制并滅菌,液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家提供,用戶可直接使用,非常方便。1、合成培養(yǎng)基的主要成分有:氨基酸、碳水化合物、無機鹽、維生素及其它輔助物質(zhì):氨基酸氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細胞對氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,必須依靠培養(yǎng)液提供,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺時,細胞生長不良而死亡。因此,各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲存2周以上時,還應重新加入原來量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是細胞生長主要能量來源,其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖和醋酸等。無機鹽培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡。此外,通過提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細胞調(diào)節(jié)細胞膜功能。Dulbecco’s 改良培養(yǎng)基與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍。山西醫(yī)用細胞培養(yǎng)基檢測
Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基適用于猴腎細胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代細胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等。云南RPMI-1640細胞培養(yǎng)基批發(fā)
Ham’sF-12K培養(yǎng)基是Ham’sF-12營養(yǎng)混合物的Kaighn’s改進型,在Ham’sF-12的基礎(chǔ)上提高了氨基酸和**酸的濃度,降低了葡萄糖的用量,并修改了鹽的成分和含量(Konigsbergs)。Ham’sF-12K培養(yǎng)基**初設(shè)計用于培養(yǎng)原代人肝細胞以及分化的大鼠和雞的細胞。針對***的細胞培養(yǎng)應用,我們提供多種組分的Ham’sF-12K改良培養(yǎng)基。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑,用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度,在低PH值時酚紅使培養(yǎng)液呈黃色,而較高的PH值時使培養(yǎng)液呈紫色,PH值~,**適合細胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點,研究表明酚紅可以模擬固醇類***(特別是雌***)的作用,因此在用到雌***敏感的細胞時(如乳腺組織),比較好使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外,一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,是體外培養(yǎng)中為預防微生物污染**常用的***,其中,青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成,對革蘭陽性菌特別有效;而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結(jié)合,抑制細菌蛋白質(zhì)的合成,對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效,但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預防絕大部分的細菌污染。 云南RPMI-1640細胞培養(yǎng)基批發(fā)
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