培養(yǎng)基制備方法與注意事項(xiàng):1、培養(yǎng)基配方選擇同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外,一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對,再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。2、培養(yǎng)基制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號,好終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。3、培養(yǎng)基成份稱量培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂,好好一次完成,不要中斷。可將配方置于傍側(cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。通過國際安全認(rèn)證,滿足生物安全實(shí)驗(yàn)室等級要求。天津培養(yǎng)基制備器多少錢
⑴倒置的小管充滿培養(yǎng)基,不留氣泡。⑵在關(guān)閉殺菌鍋的排氣閥之前,將鍋內(nèi)的氣體排空。⑶試管塞不要塞得太緊。使用硅膠塞時(shí),請勿使用橡膠塞。⑷不可過早打開殺菌鍋,等殺菌鍋內(nèi)的氣壓和溫度降到與室溫相同或相差不大時(shí)再打開殺菌鍋。如果按照以上方法操作還有氣泡,可以用水作為培養(yǎng)基組的對照試驗(yàn)。如果培養(yǎng)基組有氣泡,對照組沒有氣泡,可以確定培養(yǎng)基本身原因。為有效體現(xiàn)培養(yǎng)基其生物學(xué)特性,其制備生長及繁殖需要特定的PH范圍。甘肅培養(yǎng)基制備器多少錢物料殘留嚴(yán)重需優(yōu)化清洗程序周期設(shè)定。
利用三角培養(yǎng)瓶制備培養(yǎng)基:包扎,分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。滅菌,按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。擺斜面,滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個(gè)斜面,約占試管長度的1/2。貯存,培養(yǎng)基在30℃下放置,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。培養(yǎng)基是細(xì)胞生長的必需營養(yǎng)物質(zhì),利用三角培養(yǎng)瓶制備培養(yǎng)基可按照以上步驟操作,在使用前需確保培養(yǎng)基的無菌性,以免影響細(xì)胞正常繁殖。
培養(yǎng)基的分裝:培養(yǎng)基的分裝,應(yīng)按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時(shí)好好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí),分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中,隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌,以為測定該批培養(yǎng)基好終pH之用。培養(yǎng)基制備器解凍血清時(shí),請按照的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)!
制備培養(yǎng)基的小技巧1.培養(yǎng)基可按制備也可使用按生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品化成品培養(yǎng)基,脫水培養(yǎng)基除附有和使用說明外還應(yīng)注明有效期、貯存條件、適用性試驗(yàn)的質(zhì)控菌株和用途。配制時(shí)應(yīng)按使用說明上的要求操作,受潮結(jié)塊不能使用,以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求。2.配制培養(yǎng)基使用的容器應(yīng)是玻璃器皿或搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角燒瓶、刻度吸管、試管、培養(yǎng)皿等。使用的器皿應(yīng)洗凈,用蒸餾水沖凈,烘干后方可使用。禁用金屬容器如鐵、銅、鋁容器,避免金屬離子與培養(yǎng)基成分結(jié)合,生成有害物質(zhì),影響細(xì)菌生長。冷卻效率下降需清理散熱片灰塵堆積。山東培養(yǎng)基制備器
滅菌失效需驗(yàn)證溫度均勻性和保持時(shí)間。天津培養(yǎng)基制備器多少錢
培養(yǎng)基配制:配制用水,培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬歐姆,一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。培養(yǎng)基:培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2-7.4,若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。血清:培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基。天津培養(yǎng)基制備器多少錢