在原核表達系統(tǒng)中外源基因不僅進行正向轉(zhuǎn)錄,有時還存在反向轉(zhuǎn)錄(即生成反義RNA),這種現(xiàn)象往往是外源基因表達不高的重要原因。另外,在真核系統(tǒng),某些基因也存在反向轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)生反義RNA,參與自身表達的調(diào)控。在這些情況下,要準(zhǔn)確測定正向和反向轉(zhuǎn)錄水平就不能用雙鏈DNA探針,而只能用RNA探針或單鏈DNA探針。探針是能與特異靶分子反應(yīng)并帶有供反應(yīng)后檢測的合適標(biāo)記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標(biāo)記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術(shù)叫核酸探針技術(shù)。探針制備就是將目的基因進行標(biāo)記。電子探針可以對試樣中微小區(qū)域(微米級)的化學(xué)組成進行定性或定量分析。金山區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針五星服務(wù)

電子探針可以對試樣中微小區(qū)域(微米級)的化學(xué)組成進行定性或定量分析。可以進行點、線掃描(得到層成分分布信息)、面掃描分析(得到成分面分布圖像)。還能全自動進行批量(預(yù)置9999測試點)定量分析。由于電子探針技術(shù)具有操作迅速簡便(相對復(fù)雜的化學(xué)分析方法而言)、實驗結(jié)果的解釋直截了當(dāng)、分析過程不損壞樣品、測量準(zhǔn)確度較高等優(yōu)點,故在冶金、地質(zhì)、電子材料、生物、醫(yī)學(xué)、考古以及其它領(lǐng)域中得到日益***地應(yīng)用,是礦物測試分析和樣品成分分析的重要工具。普陀區(qū)挑選探針維修價格1953年前蘇聯(lián)制成了X射線微區(qū)分析儀,以后英、美等國陸續(xù)生產(chǎn)。

③末端標(biāo)記法(又叫尾標(biāo))。利用末端轉(zhuǎn)移酶可進行“尾標(biāo)”,尾標(biāo)適用于寡核苷酸探針標(biāo)記,寡核苷酸探針多用于核酸“點”突變的檢測,該探針可用核酸合成儀人工合成,克隆出的探針一般較長,特異性好,標(biāo)記量大,雜交的檢出信號強。探針合成的注意事項①合成探針的長短,一般在20~50個核苷酸之間。合成過長成本高,且易出現(xiàn)聚合酶合成錯誤,雜交時間長,合成太短則特異性下降。②堿基組成G-C應(yīng)含40%~60%,一種堿基連續(xù)重復(fù)不超過4個,以免非特異性雜交產(chǎn)生。③探針自身序列內(nèi)應(yīng)無互補區(qū)域,以免產(chǎn)生“發(fā)夾”結(jié)構(gòu),影響雜交??傊?,一個好的探針**終要在實踐中才能加以確認(rèn)。
DNA探針根據(jù)其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一種是從相應(yīng)的基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,還可在體外人工合成20~50個堿基的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細(xì)菌為例,細(xì)菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細(xì)菌特異的核酸探針,通常要采取建立細(xì)菌基因組DNA文庫的辦法,即將細(xì)菌DNA切成小片段后(如用限制性內(nèi)切酶做不完全水解)分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫,然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選,產(chǎn)生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其他細(xì)菌雜交的克隆則可能含有該細(xì)菌特異性DNA片段。能進行現(xiàn)場分析。無需把分析對象從樣品中取出,可直接對大塊試樣中的微小區(qū)域進行分析。

(3)X射線強度測量系統(tǒng)。特征X射線,由B系統(tǒng)中的計數(shù)管接收,并轉(zhuǎn)換成電脈沖,通過脈沖高度分析儀、計數(shù)率計、定標(biāo)器、電子電位計將其強度測量出來。(4)光學(xué)顯微鏡目測系統(tǒng)。用以準(zhǔn)確選擇需要分析的區(qū)域,并作光學(xué)觀察。(5)背散射電子圖像系統(tǒng)。(6)吸收電子圖像系統(tǒng)。(7)特征X射線圖像系統(tǒng)。電子探針的技術(shù)**是利用X射線晶體光學(xué),主要應(yīng)用兩種方法:1)晶體衍射法(X射線光譜法)。利用晶體轉(zhuǎn)到一定角度,來衍射某種波長的X射線,通過讀出晶體不同的衍射角,求出X射線的波長,從而定出樣品所含的元素。通過鑒別其特征波長或特征能量就可以確定所分析的元素。金山區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針五星服務(wù)
除H、He、Li、Be等幾個較輕元素外,還有U元素以后的元素以外都可進行定性和定量分析。金山區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針五星服務(wù)
***臺電子探針是法國制成的,是在1949年用電子顯微鏡和X射線光譜儀組合而成。1953年前蘇聯(lián)制成了X射線微區(qū)分析儀,以后英、美等國陸續(xù)生產(chǎn)。***臺掃描電子探針儀是美國于1960年制成,不僅能對試樣作點或微區(qū)分析,而且能對樣品表面微區(qū)進行掃描。原子序數(shù)12至22的元素要在真空下進行成分測定,原子序數(shù)12以內(nèi)的元素需要增添一些特殊設(shè)備才能分析。原子序數(shù)50以上的元素用L系X射線光譜進行分析,原子序數(shù)50以下的元素也可以分析,如Sn(50)可用K系x射線光譜進行分析。 [2]金山區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針五星服務(wù)
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